Tha Dithiothreitol (DTT) na àidseant lughdachaidh air a chleachdadh gu cumanta, ris an canar cuideachd an cuir-ris uaine ùr.Is e todhar organach beag moileciuil a th’ ann le dà bhuidheann mercaptan (-SH).Mar thoradh air na feartan lughdachadh agus seasmhachd aige, tha DTT air a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainnean bith-cheimigeachd agus bith-eòlas moileciuil.
Is e prìomh dhleastanas DTT ceanglaichean disulfide ann am pròtanan agus biomolecules eile a lughdachadh.Tha an ceangal disulfide na phàirt chudromach de fhilleadh pròtain agus seasmhachd, ach fo chumhachan deuchainneach sònraichte, leithid mion-sgrùdadh SDS-PAGE so-ruigsinneach, ath-mheasgachadh pròtain agus pasgadh, feumar an ceangal disulfide a lughdachadh gu dà bhuidheann thiol gus structar spàsail fhuasgladh. am pròtain.Faodaidh DTT dèiligeadh le bannan disulfide gus an lughdachadh gu buidhnean mercaptan, mar sin a’ fosgladh structar spàsail a’ phròtain agus ga dhèanamh furasta a mhion-sgrùdadh agus a làimhseachadh.
Faodar DTT a chleachdadh cuideachd gus gnìomhachd enzyme agus seasmhachd a dhìon.Ann an cuid de ath-bheachdan enzyme-catalyzed, faodaidh gnìomhachd an enzyme a bhith air a lughdachadh leis an oxidant.Faodaidh DTT freagairt le oxidants gus an lughdachadh gu stuthan gun chron, agus mar sin a’ dìon gnìomhachd agus seasmhachd an enzyme.
An coimeas ri riochdairean lughdachadh traidiseanta leithid β-mercaptoethanol (β-ME), thathas den bheachd gu bheil DTT na àidseant lughdachadh nas sàbhailte agus nas seasmhaiche.Chan e a-mhàin gu bheil e seasmhach ann am fuasgladh uisgeach, ach bidh e cuideachd a ’cumail suas na feartan lughdachadh aige fo chumhachan àrd teòthachd agus searbhag.
Tha cleachdadh DTT gu math sìmplidh.San fharsaingeachd, tha DTT air a sgaoileadh ann am bufair iomchaidh agus an uairsin air a chur ris an t-siostam deuchainneach.Feumar an dùmhlachd as fheàrr de DTT a dhearbhadh a rèir an deuchainn shònraichte, agus mar as trice air a chleachdadh anns an raon 0.1-1mM.Faodaidh dùmhlachd nas ìsle droch bhuaidh air fàs cealla a lughdachadh agus faodaidh iad cytotoxicity a lughdachadh mar thoradh air cus cuideam air pròtanan targaid.Dh’ fhaodadh dùmhlachd nas àirde cus eallach metabolach cealla adhbhrachadh, a’ toirt buaidh air fàs cealla agus èifeachdas faireachdainn.
Is e an dòigh air an dùmhlachd as fheàrr a dhearbhadh measadh a dhèanamh air ìre faireachdainn a’ phròtain targaid le bhith a’ dèanamh deuchainnean inntrigidh IPTG aig diofar chruinneachaidhean.Faodar deuchainnean cultair beag-sgèile a dhèanamh a’ cleachdadh raon de cho-chruinneachaidhean IPTG (me 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, msaa) agus faodar buaidh faireachdainn aig diofar chruinneachaidhean a mheasadh le bhith a’ lorg ìre faireachdainn a’ phròtain targaid (me Western blot no lorg fluorescence).A rèir nan toraidhean deuchainneach, chaidh an dùmhlachd leis a’ bhuaidh faireachdainn as fheàrr a thaghadh mar an dùmhlachd as fheàrr.
A bharrachd air an sin, faodaidh tu cuideachd iomradh a thoirt air an litreachas buntainneach no eòlas deuchainn-lannan eile gus tuigse fhaighinn air an raon dùmhlachd IPTG a thathas a ’cleachdadh gu cumanta fo chumhachan deuchainneach coltach ris, agus an uairsin a bharrachadh agus atharrachadh a rèir feumalachdan deuchainneach.
Tha e cudromach toirt fa-near gum faodadh an dùmhlachd as fheàrr a bhith eadar-dhealaichte a rèir diofar shiostaman faireachdainn, pròtanan targaid, agus suidheachaidhean deuchainneach, agus mar sin tha e nas fheàrr an ìre as fheàrr a dhèanamh a rèir cùis ma seach.
Ann an geàrr-chunntas, tha DTT na àidseant lughdachaidh cumanta a dh’ fhaodar a chleachdadh gus bannan disulfide ann am pròtanan agus biomolecules eile a lughdachadh agus gus gnìomhachd enzyme agus seasmhachd a dhìon.Chaidh a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainnean bith-cheimigeachd agus bith-eòlas moileciuil.
Ùine puist: Sultain-28-2023