'S e àidseant lughdachadh a thathas a' cleachdadh gu cumanta a th' ann an dithiothreitol (DTT), ris an canar cuideachd an stuth-leasachaidh uaine ùr. 'S e todhar organach beag moileciuil a th' ann le dà bhuidheann mercaptan (-SH). Air sgàth a fheartan lughdachadh agus a sheasmhachd, tha DTT air a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainnean bith-cheimigeachd agus bith-eòlas moileciuil.
’S e prìomh dhleastanas DTT ceanglaichean disulfide a lùghdachadh ann am pròtainean agus bith-mholacilean eile. Tha an ceangal disulfide na phàirt chudromach de phasgadh agus seasmhachd phròtainean, ach fo chumhachan deuchainneach sònraichte, leithid mion-sgrùdadh SDS-PAGE lùghdachail, ath-cho-chur agus pasgadh phròtainean, tha e riatanach an ceangal disulfide a lùghdachadh gu dà bhuidheann thiol gus structar fànais a’ phròtain fhuasgladh. Faodaidh DTT freagairt le ceanglaichean disulfide gus an lùghdachadh gu buidhnean mercaptan, agus mar sin a’ fosgladh structar fànais a’ phròtain agus ga dhèanamh furasta a sgrùdadh agus a làimhseachadh.
Faodar DTT a chleachdadh cuideachd gus gnìomhachd agus seasmhachd einnsein a dhìon. Ann an cuid de ath-bheachdan air an catalachadh le einnsein, faodaidh an oxidant gnìomhachd an einnsein a lùghdachadh. Faodaidh DTT freagairt le oxidants gus an lughdachadh gu stuthan gun chron, agus mar sin a’ dìon gnìomhachd agus seasmhachd an einnsein.
An coimeas ri riochdairean lughdachadh traidiseanta leithid β-mercaptoethanol (β-ME), thathas den bheachd gur e DTT riochdaire lughdachadh nas sàbhailte agus nas seasmhaiche. Chan e a-mhàin gu bheil e seasmhach ann am fuasgladh uisgeach, ach bidh e cuideachd a’ cumail a fheartan lughdachadh fo theodhachd àrd agus suidheachaidhean searbhag-bonn.
Tha cleachdadh DTT caran sìmplidh. San fharsaingeachd, thèid DTT a sgaoileadh ann am bufair iomchaidh agus an uairsin a chur ris an t-siostam deuchainneach. Feumar an dùmhlachd as fheàrr de DTT a dhearbhadh a rèir an deuchainn shònraichte, agus mar as trice thèid a chleachdadh anns an raon 0.1-1mM. Faodaidh dùmhlachdan nas ìsle droch bhuaidhean air fàs cealla a lughdachadh agus faodaidh iad citotocsaineachd a lughdachadh mar thoradh air cus-chur an cèill de phròtainean targaid. Faodaidh dùmhlachdan nas àirde cus eallach metabolach cealla adhbhrachadh, a’ toirt buaidh air fàs cealla agus èifeachdas cur an cèill.
’S e an dòigh air an dùmhlachd as fheàrr a dhearbhadh ìre abairteachaidh a’ phròtain targaid a mheasadh le bhith a’ dèanamh dheuchainnean brosnachaidh IPTG aig diofar dùmhlachdan. Faodar deuchainnean cultar beag-sgèile a dhèanamh a’ cleachdadh raon de dhùmhlachdan IPTG (me 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, msaa.) agus faodar buaidh abairteachaidh aig diofar dùmhlachdan a mheasadh le bhith a’ lorg ìre abairteachaidh a’ phròtain targaid (me Western blot no lorg fluorescence). A rèir nan toraidhean deuchainneach, chaidh an dùmhlachd leis a’ bhuaidh abairteachaidh as fheàrr a thaghadh mar an dùmhlachd as fheàrr.
A bharrachd air an sin, faodaidh tu cuideachd iomradh a thoirt air an litreachas buntainneach no eòlas obair-lannan eile gus tuigse fhaighinn air an raon dùmhlachd IPTG a thathas a’ cleachdadh gu cumanta fo chumhachan deuchainneach coltach ris, agus an uairsin an leasachadh agus an atharrachadh a rèir feumalachdan an deuchainn.
Tha e cudromach a thoirt fa-near gum faod an dùmhlachd as fheàrr atharrachadh a rèir diofar shiostaman abairteachaidh, pròtainean targaid, agus suidheachaidhean deuchainneach, agus mar sin is fheàrr a dhèanamh an fheum as fheàrr a dhèanamh air stèidh cùis air chùis.
Ann an geàrr-chunntas, 's e àidseant lughdachadh a thathas a' cleachdadh gu cumanta a th' ann an DTT a dh'fhaodar a chleachdadh gus bannan disulfide a lughdachadh ann am pròtainean agus bith-mholacilean eile agus gus gnìomhachd agus seasmhachd einnsein a dhìon. Chaidh a chleachdadh gu farsaing ann an deuchainnean bith-cheimigeachd agus bith-eòlas moileciuil.
Àm puist: 28 Sultain 2023